冷蔵輸送された2細胞期胚の回収

材料

1. 偽妊娠雌マウス
2. ディッシュ（コーニング　35mm X 10mm　Cat.No.430588）
3. オートピペッター（GILSON　PIPETMAN　P-200）
4. ゲルローディングチップ（ビーエム機器　Cat.No.010-R204S）
5. キャピラリー
6. 胚培養液（KSOM/AA、mWMなど）
7. 流動パラフィン（ナカライテスク　Cat.No.26137-85）

　

方法

冷蔵輸送された2細胞期胚の回収

１　発泡スチロール箱から魔法瓶を取り出し、さらに紙箱を取り出す。紙箱を室温で30分間静置する。
その間に、胚はチューブの底に完全に沈む。


２　30分経過したら、紙箱のフタをあけて静かに綿を取り出し、0.5mLチューブを取り出す。


３　取り出したチューブのフタを開け、ゲルローディングチップを用いてチューブ上層部の培養液（M２）を200µL吸引し、ディッシュの端に移す。


４　ゲルローディングチップの先端をチューブの底まで差し込み、すべてのM２をゆっくりと吸引して、ディッシュの中央に移す。
＊ディッシュにM２を出したとき、気泡がM２表面に浮いていると、胚が観察しにくくなるので、チップ内に気泡を吸い込まないように注意する。


５　ディッシュ上に取り出したM２から胚を回収する。
　＊保存した胚数を回収できない場合は、３で吸引した200µLのM2でチューブ内を共洗いする。
６　回収した胚を、流動パラフィンで被覆したKSOM/AAなどの培養液のドロップ（100µL）で3回洗浄後、偽妊娠第一日目（膣栓確認日）のレシピエントの卵管に移植する。

＊胚の回収は、胚移植直前に行う。冷蔵胚到着日に胚移植を行わない場合は、発泡スチロール箱ごと、４～８°Cの冷蔵庫で保管する（冷蔵庫の温度が４～８°Cであることを、必ず、チェックしておく）。
＊＊胚は、発送日を含めて最大４日間保存（７２時間）可能であるが、到着日当日に移植するのが望ましい。



７　輸送に使われた器材（発泡スチロール箱・魔法瓶・保冷剤・紙箱・ボタン型温度記録計）は、CARDにご返送下さい。