チューブを用いた精子の凍結と融解

本ページで解説されている精子凍結法はストローを用いて開発されたものであるが、チューブによる精子の凍結も可能である。

材料

1. 雄マウス（12週齢以上）
2. 過排卵処理した雌マウス
3. ノエス剪刀（森田製作所 TEL 03-3811-9730　特注品）
4. FERTIUP®-精子凍結保存液（九動株式会社 fertiup(at)kyudo.co.jp）
5. FERTIUP®-精子前培養培地（九動株式会社 fertiup(at)kyudo.co.jp）
6. CARD MEDIUM（九動株式会社 fertiup(at)kyudo.co.jp）
7. ディッシュ（コーニング　35mm X 10mm　Cat.No.430588）
8. イエローチップ（ビーエム機器　Cat.No.110-96R）
9. オートピペッター（GILSON　PIPETMAN　P-10　P-100）
10. 凍結保存用チューブ（SUMILON 1.2mLセラムチューブ インナーキャップ　Cat.No.MS-4501W）
11. ケーン（マイサイエンス　アンプルケーン　Cat.No.C-7）
12. ケーン用スリーブ（NUNC　Cat.No.5016-0001）
13. 発泡スチロール箱
14. 発泡スチロール片（厚さ1.5cm）
15. 液体窒素
16. 液体窒素保管器
17. 恒温水槽（37℃）
18. CO2インキュベーター（37°C　5% CO2　95% air）

方法

精子懸濁液の作製

１　ストローを用いた精子凍結の方法と同様に精子懸濁液の作製を行う。

精子の凍結

１　35μLの精子懸濁液を凍結保存用チューブに入れ、ケーンに装着する。



２　発泡スチロール箱に液体窒素を入れ、発泡スチロール片（ 厚さ1.5cm ）を浮かべてケーンをのせる。
　＊凍結保存用チューブを、液体窒素の液面から 1.5cm 離れた状態で冷却する。





３　発泡スチロール箱のフタを閉めて、１０分間静置する。

４　ケーンを発泡スチロール箱から取り出し、素早く液体窒素保管器に入れる。

精子融解の前の準備

１　 ストローを用いた凍結精子の融解方法と同様に未受精卵子を採取し、３０～６０分間培養しておく。

２　精子を融解する３０分前に、精子前培養用ディッシュ（90µLのFERTIUP®-精子前培養培地ドロップ1個）を作製し、インキュベーター内に静置しておく。

精子の融解

１　液体窒素保管器からチューブを取り出し、フタを開けてチューブ内の液体窒素を捨てる。

２　 チューブのフタを閉め、１０分間３７℃の温水中に静置し加温する。





３　 １０分後、10μLの精子懸濁液を精子前培養用ディッシュのドロップに導入する。
　＊１本のチューブから精子前培養用ディッシュ３枚に精子懸濁液を導入する事が可能。



４　 ３の精子前培養用ディッシュをインキュベーターに入れ、３０分間前培養を行う。



５　 ストローを用いた凍結精子の融解方法と同様に媒精を行う。

更新履歴

• 新規：2015.09.03