冷蔵輸送された精巣上体尾部の取り出し

材料

CARD冷蔵輸送キットにより輸送されたマウス精巣上体尾部
FERTIUP®-精子前培養培地（九動株式会社 fertiup(at)kyudo.co.jp）
mHTF
オートピペッター（GILSON　PIPETMAN　P-200）
イエローチップ（ビーエム機器　Cat.No.110-96R）
流動パラフィン（ナカライテスク　Cat.No.26137-85）
ディッシュ（コーニング　35mm X 10mm　Cat.No.430588）
ハサミ解剖用（夏目製作所　小直剪刀　Cat.No.B-12）
ピンセット解剖用（夏目製作所　尖鋭ピンセット　Cat.No.A-45）
濾紙
CO2インキュベーター（37°C　5% CO2　95% air）

方法

１　精巣上体尾部を取り出す３０分前に、精子前培養用ディッシュ（100µLのFERTIUP®-精子前培養培地ドロップ1個）を作製し、インキュベーター内に静置する。

２　発泡スチロール箱から魔法瓶を取り出し、その中の紙箱から、精巣上体尾部が入った0.2 mL チューブを取り出す。

３　0.2 mL チューブのふたを開け、精巣上体尾部をろ紙上に取り出し、保存液を拭う。
　　＊余分な脂肪・組織・血液が付着している場合は、ハサミ・ピンセットを用いて取り除く。

４　精巣上体尾部を洗浄用ディッシュのmHTFドロップで３回洗浄後、ろ紙でmHTFを拭う。
　　＊洗浄用ディッシュ（約100µLのmHTFドロップ３個）は、精巣上体尾部を取り出す直前に作製する。

５　精巣上体尾部を、精子前培養用ディッシュの流動パラフィン中に沈める。

６　精巣上体尾部より精子を採取し、体外受精に供する。精子の採取と体外受精は、新鮮精子を用いた体外受精と同様に行う。
ポイント：精巣上体尾部に切れ込みを入れて精子塊を採取するとき、精子塊が露出しにくい場合は、再度切り込みを入れ、出来るだけ多くの精子を採取する。
注意：冷蔵精子に用いる受精用培地(CARD MEDIUM)の調整方法は、新鮮精子を用いた体外受精と異なるので、受精用培地の取扱説明書をよく読み、受精用ディッシュの準備を行うこと。

更新履歴

新規 : 2012.03.13