使用低温运输的附睾精子进行体外受精

材料和设备

1. 低温运输的附睾尾
2. FERTIUP®（预培养液：PM；COSMO BIO）
3. mHTF
4. 微量移液器
5. 塑料培养皿（35mm×10mm Cat.No.430588；CORNING）
6. 精细（眼科）剪刀
7. 一副5#钟表镊
8. 滤纸
9. 二氧化碳培养箱（37℃，5% CO2、95%空气）

程序

1. 在低温运输的附睾采集精子前30分钟以上，把1滴（100μL/滴）的FERTIUP®（PM）滴在培养皿中，再用液体石蜡覆盖液滴，置于培养箱中（37℃，空气中含5%的CO2）。
   
   
   
   
   
2. 从泡沫运输箱内取出含有样本的0.2mL冷冻管
   
   
   [取出样品]
   
   
   
3. 打开冷冻管，用镊子取出附睾尾，置于滤纸上去除保存液。
   
   
   
   
   
   
4. 将附睾尾放在一个含有三滴mHTF培养液的液滴中分别清洗一次。洗完后，用滤纸去除附睾尾上的mHTF。
   

   备注:	做一个清洗用培养皿，再培养皿中滴入3滴（约100μL/滴）mHTF培养液滴，不用液体石蜡封面。

   
   
   
   
   
   
5. 将清洗后的附睾尾置于液体石蜡封面的精子培养皿内。
   低温运输的附睾精子具有新鲜精子相同的体外受精法。

   注意:	如果从附睾尾的一个切口很难取出精子，那么可以在附睾尾部多做一个切口就可以释放更多的精子。

   注意:	有三种不同的方法来准备CARD MEDIUM，这取决于是使用新鲜的、冻融的还是低温冷藏的精子来进行体外受精。 请参阅CARD MEDIUM说明手册。

更新记录

1. 更新 : 1 May, 2018